Авторы
Список обозначений
Введение
1. Терминология
2. Объекты исследований
3. Испытуемые
4. Регламент фармакокинетического исследования
5. Аналитический метод
6. Анализ фармакокинетических данных
7. Статистическая оценка биоэквивалентности
8. Исключение резко выделяющихся наблюдений
9. Группа исследователей-специалистов в области фармакокинетики
10. Протокол проведения исследований
11. Отчетная документация
Приложение 1. Основные принципы составления информации для добровольца с формой информированного согласия
Приложение 2. Отчет о серьезном нежелательном явлении
Приложение 3. Вопросы планирования исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов
Приложение 4. Исследования кинетики растворения лекарственных средств
Приложение 5. Перечень лекарственных средств, для которых допускается проведение исследований биоэквивалентности на крупных лабораторных животных

7. Статистическая оценка биоэквивалентности

Оценка биоэквивалентности проводится по параметрам сравнения, выбранным в соответствии со схемой введения препарата (однократное и многократное введение) и его лекарственной формой (обычная или пролонгированного действия).

Статистический анализ проводят в предположении о лог-нормальном распределении параметров AUC, C_max и C_max/AUC и нормальном распределении остальных параметров за исключением t_max. В предположении о лог-нормальном распределении, сравнение средних значений параметров для исследуемого препарата и препарата сравнения проводится на основе мультипликативной модели, а доверительные интервалы строятся для отношений соответствующих средних значений. После проведения логарифмического преобразования эти показатели анализируются с помощью дисперсионного анализа (ANOVA; параметрический метод).

Для обычной рандомизированной перекрестной схемы статистическая модель дисперсионного анализа должна включать следующие факторы, вносящие вклад в наблюдаемую вариацию данных:

- различия между препаратами,
- различия между испытуемыми (межиндивидуальные различия),
- последовательность приема препаратов,
- периоды исследования.

Дисперсионный анализ применяется для проверки гипотез о статистической значимости вклада каждого из указанных факторов в наблюдаемую вариабельность. Полученная с помощью дисперсионного анализа оценка остаточной вариации используется при расчете доверительного интервала для отношения средних значений соответствующего параметра.

Процедура статистического сравнения состоит в вычислении параметрических двусторонних 90%-ных доверительных интервалов для отношений соответствующих средних значений для исследуемого препарата и препарата сравнения. Препараты считаются биоэквивалентными, если границы оцененного доверительного интервала для AUC_t или AUC_бесконечность, а также AUC_тау,ss находятся в пределах 80 - 125%. Для показателей С_мах и C_max/AUC_t, C_max/AUC_бесконечность или C_max/AUC_тау,ss, характеризующихся большей вариабельностью, эти пределы составляют 75 - 133%.

8. Исключение резко выделяющихся наблюдений

При проведении исследования биоэквивалентности может быть обнаружено, что у одного или нескольких испытуемых различия между параметрами или их отношениями значимо отличаются от таковых у основной группы (резко выделяющиеся наблюдения - "outliers"). Выявление таких наблюдений проводится при помощи специальных статистических тестов. Для демонстрации наличия таких наблюдений приводятся графики индивидуальных стандартизованных различий (центрированных по среднему значению и нормированных по стандартному отклонению).

Резко выделяющиеся наблюдения могут не приниматься в расчет при оценке биоэквивалентности при условии, что справедливость исключения этих данных доказана.

9. Группа исследователей-специалистов в области фармакокинетики

Для проведения исследований выделяются сотрудники, обладающие профессиональным опытом в области количественного анализа лекарственных веществ в биоматериале и математического анализа фармакокинетических данных.

10. Протокол проведения исследований

В протоколе должны быть отражены:

- сведения об изучаемых лекарственных средствах (лекарственная форма, содержание действующего вещества, фирма-производитель);
- сведения об испытуемых и об их количестве;
- план рандомизации;
- доза и режим дозирования,
- интервал времени между приемом препаратов;
- биоматериал, в котором предполагается определять концентрацию действующего вещества;
- схема отбора проб, условия их хранения;
- сведения об аналитическом методе;
- сведения о методах фармакокинетического анализа;
- сведения о критериях биоэквивалентности.

11. Отчетная документация

В отчете об исследованиях биоэквивалентности должны быть представлены:

- утвержденный протокол проведения исследований;
- названия исследуемых лекарственных средств;
- наименование фирм-изготовителей;
- номера серий исследуемых препаратов, данные о сроке их годности;
- сведения о содержании действующего вещества в изученных препаратах;
- демографические и антропометрические данные испытуемых;
- клинические данные (если исследование биоэквивалентности проведено на больных), в которых указывается анамнез заболевания, диагноз, характер поражения внутренних органов и их функциональное состояние на момент проведения исследований;
- способ введения лекарственного препарата и дозы;
- план рандомизации;
- методика отбора биоматериала и его предварительной обработки, условия хранении # проб;
- описание аналитического метода, включающее метрологические характеристики и демонстрационные хроматограммы, если использованы хроматографические методы;
- описание процедур фармакокинетического анализа и оценки биоэквивалентности с указанием использованных программных средств;
- результаты определения содержания действующего вещества в биопробах, соответствующие средние значения и величины стандартных отклонений;
- индивидуальные фармакокинетические профили;
- усредненные фармакокинетические профили;
- индивидуальные значения параметров фармакокинетики, соответствующие средние значения и величины стандартных отклонений;
- средние геометрические значения лог-нормально распределенных параметров фармакокинетики, соответствующие интервальные оценки;
- результаты дисперсионного анализа, значения соответствущих коэффициентов вариации;
- статистические критерии, использованные для оценки биоэквивалентности, и результаты этой оценки;
- выводы.

Основная литература

1. Соловьев В.Н., Фирсов А.А., Филов В.А. - Фармакокинетика (руководство). - М.: Медицина, 1980-423 с.
2. Фирсов А.А., Пиотровский В.К. Фармакокинетические методы в биоинформации. Итоги науки и техники. - М.: ВИНИТИ, 1984. Т.14.- С.114 - 227.
3. Bioequivalence Assessment. Methods and Applications, Ed. Steinijans V. W. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. and Toxicol., Vol. 30 (Suppl. 1), 1992, pp. 1-66.
4. Investigation of Bioavailability and Bioequivalence - Commission of the European Communities, III/54/89-EN, December 1991, pp. 1-20.
5. In vivo bioequivalence guidances - U.S. Pharmacopeia 24-NF 19, Supplement 2, 2000, 1090, pp. 2056-2098.
6. Note for Guidance on the Investigation of Bioavailability and Bioequivalence. - The European Agency for the Evaluation of Medical Products, Committee for Proprietary Medicinal Products, London, July 2001, pp. 1-18.
7. Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence. - U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research, January 2001.
8. Waiver of in vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Immediate - Release Solid Oral Dosage Forms Based on a Biopharmaceutics Classification System. - U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research, August 2000.
9. Diletti E., Hauschke D., Steinijans V. W. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. and Toxicol. Sample size determination for bioequivalence assessment by means of confidence intervals. 1991, Vol. 29, pp. 1-8.
10. Hauschke D., Steinijans V. W., Diletti E. A. Distribution-free Procedure for the Statistical Analysis of Bioequivalence Studies. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. Toxicol. 1990, Vol. 28, pp. 72-78.
11. Hills M., Armitage P. The Two-Period Cross-Over Clinical Trial. Br. J. Clin. Pharmac. 1979, Vol. 8, pp. 7-20.
12. Lund R. E. Tables for an Approximate Test for Outliers in Linear Models. Technometrics. 1975, Vol. 17, pp 473-476.
13. Schuirmann D. J. A comparison of the two one-side tests procedure and the power approach for assessing the equivalence of average bioavailability. J. Pharmacokinet. Biopharm. 1987, Vol. 15, pp. 657-680.
14. Shein-Shung Chow, Jen-Pei Liu. Design and Analysis of Bioavailability and Bioequivalent Studies. Marcel Dekker, New York, 1992.
15. Steinijans V. W., Diletti E. Statistical Analysis of Bioavailability Studies: Parametric and Nonparametric Confidence Intervals. Eur. J. Clin. Pharmacol. 1983, Vol. 24, pp 127-136.
16. Steinijans V. W., Sauter R., Jonkman H. G., et al. Bioequivalence Studies: Single vs Multiple Dose. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. Toxicol. 1989, Vol. 27, pp. 261-266.
17. Wijnand H. P. Bioequivalence assessment of drug formulations. Non-parametric versus parametric analysis. Doctor's thesis. Leiden, 1994, pp. 1 - 60.

Приложение 1

Основные принципы составления информации для добровольца с формой информированного согласия

Форма информированного согласия добровольца (волонтера) на участие в исследованиях биоэквивалентности лекарственного средства

Я,________________________________________________, проживающий по адресу, ____________________________________________________________________, тел. ____________________. Паспорт: серия ___________________ N  ________, выдан ___________________________, ознакомился с информацией о целях предстоящего исследования биоэквивалентности препарата и получил копию данного документа. Я имел возможность обсудить с врачом-исследователем все интересующие меня вопросы и получил удовлетворяющие меня ответы.
Я предупрежден о том, что исследование биоэквивалентности лекарственного препарата ________________ будет вызывать некоторый дискомфорт, а также не исключена возможность вредного влияния изучаемого лекарственного препарата на мое здоровье или самочувствие.
Я добровольно соглашаюсь принять участие в исследовании биоэквивалентности вышеупомянутого лекарственного препарата, извещен, что имею право отказаться или в любой момент прекратить участие в данном исследовании, что не повлечет за собой изменения отношения ко мне медицинского персонала.
В случае моего решения о прекращении моего участия в исследовании биоэквивалентности, я обязуюсь информировать об этом врача-исследователя для того, чтобы предоставить ему возможность оценить мое состояние и дать необходимые рекомендации.
Я согласен выполнять инструкции, добросовестно сотрудничать с врачом-исследователем и немедленно сообщать ему о любого рода изменениях моего здоровья.
Я извещен, что информация, полученная в ходе исследования является конфиденциальной. Я согласен с тем, чтобы она использовалась в полной мере и передавалась в регуляторные органы и официальные медицинские инстанции, а также уполномоченным лицам и представителям спонсора.
Я извещен, что если моему здоровью будет причинен ущерб, связанный с моим участием в исследовании, страховая компания выплатит мне компенсацию. Сумма компенсации может быть пересмотрена в случае моей вины в возникновении ухудшения здоровья.

Ф.И.О.
добровольца _________________________________________________
Подпись добровольца: _______________________ Дата _____________
Ф.И.О. врача-исследователя _____________________________________
Подпись врача-исследователя: ____________________ Дата __________

Приложение 2

Отчет о серьезном нежелательном явлении

Информация для добровольцев, участвующих в исследованиях биоэквивалентности лекарственного средства
Исследование биоэквивалентности лекарственных средств - это сравнительное фармакокинетическое изучение лекарственных средств, выпускаемых разными фирмами и имеющими в своем составе одно и то же лекарственное средство.

Исследования проводятся на здоровых добровольцах.

Для определения состояния здоровья добровольца проводится полное обследование, включающее клинические и лабораторные тесты (анализы крови, мочи, исследование на ВИЧ, RW, вирусный гепатит В и С, ЭКГ). Если нет противопоказаний, доброволец включается в группу испытуемых.

Доброволец подписывает информированное письменное согласие, в котором он дает свое согласие на участие в исследовании. Доброволец

обязуется выполнять следующие правила:

- в течение недели до исследования и во время исследования доброволец не принимает лекарственные препараты. При необходимости приема лекарственных средств следует проконсультироваться с врачом-исследователем;
- накануне исследования и во время исследования доброволец не употребляет кофеин-содержащие продукты (чай, кофе и др.);
- за семь дней до исследования и во время проведения исследования доброволец не употребляет алкоголь и ограничивает себя в курении;
- накануне исследования последний прием пищи должен заканчиваться не позднее 19 часов, ужин не должен включать жирную пищу;
- исследование проводится в стационарных условиях, доброволец обязан соблюдать правила пребывания в стационаре.

Принципиальная схема исследования биоэквивалентности лекарственного средства:

- Во время исследования добровольцы находятся в специальном блоке, где им созданы необходимые гигиенические условия и будет предложено 3-4 разовое питание. В случае необходимости добровольцам оказывается квалифицированная медицинская помощь.
- Исследование биоэквивалентности состоит из двух равнозначных периодов.

Каждый из этих периодов начинается в - часов утра, когда добровольцу устанавливают в одну из вен руки катетер, через который в процессе исследования по заранее представленной схеме будет проводиться отбор крови. Всего будет взято не более 150-200 мл крови. При необходимости (в случае тромбоза катетера, выхода катетера из вены и др.) катетер будет переставлен в другую вену.

- После первого отбора крови доброволец должен принять исследуемый лекарственный препарат или его аналог. Последовательность приема препаратов будет случайной.
- После отбора последней пробы крови у добровольца будет удален внутривенный катетер, и он будет отпущен домой до следующего периода исследования.
- В случае возникновения нежелательных явлений добровольцу будет оказана квалифицированная медицинская помощь.
- Перерыв между периодами исследований составляет ___ дней.

Доброволец в промежутке между ними должен соблюдать вышеизложенные требования.

- В случае неявки добровольца на 2-ой период исследований, он исключается из исследований и лишается права на вознаграждение.
Условиями прекращения участия в исследовании добровольца являются:
- желание испытуемого
- несоблюдение правил проведения исследования
- медицинские показания

На время исследования добровольцы страхуются на случай возникновения возможных нежелательных явлений, связанных с применением лекарственных препаратов.
При возникновении любых вопросов, связанных с проведением исследования или изменением в состоянии здоровья, следует обращаться к врачу____________________________________________________________
Контактный телефон _____________________________

Приложение 3

Вопросы планирования исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов

Особенности статистического анализа исследований биоэквивалентности связаны со структурой перекрестной схемы RT/TR. При планировании исследований биоэквивалентности возникает проблема определения минимального числа пациентов, необходимого для получения статистически значимого заключения в соответствии с принятыми Рекомендациями, а после завершения статистического анализа полученных данных - проблема оценки мощности теста.

Пусть мю_T и мю_R - генеральные средние показатели сравнения для испытуемого препарата и препарата сравнения, соответственно. Гипотеза о биоэквивалентности может быть сформулирована в терминах отношения сравниваемых параметров или в терминах их абсолютных различий. Для параметров, связанных с определением концентрации лекарственного вещества (AUC, C_max, C_max/AUC и пр.), принято сравнение отношений (в предположении об лог-нормальном распределении и мультипликативной модели данных). Если Q_1, и Q_2 - нижняя и верхняя принятые допустимые границы биоэквивалентности, нулевая гипотеза об отсутствии эквивалентности может быть записана как:

мю             мю
T              T
Н  : ───── < Q ,или ───── >Q ,
0    мю      1      мю     2
R              R


а соответствующая альтернативная гипотеза о наличии биоэквивалентности формулируется как:

мю
T
Н  : Q  <= ───── <=  Q .
A    1     мю        2
R

В случае проведения логарифмического преобразования формулировка гипотез также трансформируется:

Н' :сигма  <= мю - мю  <= сигма ,
A       1      T    R         2

где сигма_i = ln(Q_i), при i = 1,2; в этом случае мю_т - мю_R - разность средних значения показателей сравнения, соответствующая логарифмической трансформации. Такой же вид гипотезы соответствует тестированию абсолютных различий в случае, если предполагается нормальное распределение показателя сравнения и аддитивная модель данных. Допустимые значения границ зафиксированы в настоящих Рекомендациях.

Вывод об эквивалентности в результате тестирования гипотез может быть сделан, если 100 х (1-2-альфа)% доверительный интервал для разницы (или отношения) средних значений полностью располагается внутри выбранного интервала эквивалентности.

Необходимость определения требуемого числа испытуемых диктуется экономическими и этическими соображениями. Число испытуемых, необходимое для получения статистически значимого заключения о биоэквивалентности исследуемых препаратов, зависит от уровня значимости (альфа), мощности теста (1 - бета), допустимой величины различий эпсилон и величины дисперсии данных сигма. Три первые величины регламентированы настоящими Рекомендациями. Вариация данных оценивается либо по прошлому опыту проведения аналогичных исследований, либо по литературным данным, либо по пилотному исследованию. Чем более вариабельны данные, тем больше испытуемых потребуется для демонстрации биоэквивалентности лекарственных препаратов.

При проведении исследований биоэквивалентности в соответствии с обычным перекрестным дизайном в предположении об отсутствии влияния периода наблюдения вычисление доверительных интервалов базируется на парном критерии Стьюдента. Поэтому самым простым способом оценки необходимого числа испытуемых (n) будет расчет по следующей формуле в предположении равенства средних значений мю = мю_R мю_T:

2                         2
2сигма  (t(f,альфа) + t(f,бета))
n = ───────────────────────────────────,                   (1)
2
эпсилон

где эпсилон - величина допустимых различий между средними значениями, число степеней свободы f = n - 1 в случае вычисления доверительных интервалов на базе парного критерия Стьюдента, f = n - 2 в случае, если учитывается влияние периода наблюдений и доверительный интервал строится на базе подходящей процедуры дисперсного анализа. В любом случае получается, что для определения по таблицам значения коэффициента Стьюдента t(f,a) необходимо знать число включенных пациентов n, а именно его мы и пытаемся рассчитать по формуле. Для разрешения этого противоречия обычно применяют итерационную процедуру, а в качестве первоначальной оценки значения коэффициента Стьюдента берется его соответствующее значение при бесконечном числе степеней свободы, то есть соответствующее значение стандартного нормального распределения Z_альфа. В качестве значения сигма в случае учета влияния периода наблюдений обычно используют среднее квадратичное отклонение, оцененное с помощью анализа вариации для перекрестного дизайна (оценка значения сигма - квадратный корень из среднего квадрата "ошибки", или остаточной внутрииндивидуальной вариации).

Последнее уравнение может быть модифицировано и выражено в терминах коэффициента вариации, CV = сигма/мю и омега = эпсилон/мю как:

2                        2
CV (t(f,альфа) + t(f,бета))
n = 2 ─────────────────────────────                        (2)
2
омега

В соответствии с настоящими рекомендациями при этом определении величина омега не должна превышать значение 0,2 (20%).

Приведенные формулы для оценки необходимого числа испытуемых применимы как в случае аддитивной, так и в случае мультипликативной модели данных. Различия заключаются в оценки величины дисперсии сигма2, или коэффициента вариации CV. Так, в случае предположения о лог-нормальном распределении данных и сравнения отношения средних значений коэффициент вариации оценивается по значению среднего квадрата ошибки сигма2, полученному в результате дисперсионного анализа для трансформированных данных (CV = кв.корень(expсигма2)-1). Если квадрат CV достаточно мал, CV ~ сигма.

Рассмотрим случай, когда известно, что предположение о равенстве средних значений показателей мю = мю_R = мю_T нарушается. Пусть теперь сигма = мю_Т - мю_R. Поскольку кривые мощности процедуры проверки двух односторонних тестов симметричны относительно нуля, рассмотрим случай 0< дельта = дельта_0 < 0,2мю_R.

Тогда необходимое число испытуемых в исследовании для поддержания мощности на уровне 80% и допустимых различиях омега % (обычно 20%) определяется по формуле:

2                        2
CV (t(f,альфа) + t(f,бета))
n (дельта ) >= 2 ────────────────────────────,               (3)
0                       ' 2
[омега - дельта ]
0

дельта
'               0
где дельта  = 100 x ───────, CV - коэффициент вариации данных (СТ = 100 x
0           мю
R
дельта
─────── критическая   точка  распределения  Стьюдента, f - число степеней
мю
R
свободы (f = /n-1). Наличие в  правой  части  формулы  значения  n  опять
приводит к необходимости применения итерационной процедуры поиска.

Может быть также решена и обратная задача - по числу испытуемых п, коэффициенту вариации CV, величине различий омега и уровня значимости альфа оценить мощность статистического теста оценки биоэквивалентности. Для этого, пользуясь таблицей распределения Стьюдента, определяют вероятность ошибки второго рода бета по значению коэффициента Стьюдента, вычисленного по следующей формуле (в предположении равенства средних значений показателя сравнения):

омега               n
t(f,бета) = ────── кв. корень (───) - t(f, альфа).
СV                2

В случае нарушения предположения о равенстве средних значений последняя формула может быть записана как:

[дельта - омега]
0                      n
t(f,бета) = ─────────────── кв. корень (───) - t(f, альфа).
СV                     2

Мощность статистического теста должна быть не меньше 80%.

Приложение 4

Исследования кинетики растворения лекарственных средств

Для лекарственного средства, заявленного для регистрации в нескольких дозировках, проводится оценка эквивалентности кинетики перехода действующего вещества в раствор для каждой дозировки. Методически степень перехода действующего вещества в раствор определяют в условиях, описанных для данного препарата в соответствующей фармакопейной статье, для нескольких (не менее трех) временных точек, расположенных равномерно в интервале времени исследования. Последняя точка профиля должна соответствовать моменту перехода в раствор не менее 90% лекарственного средства или фазе насыщения процесса.

Эквивалентность кинетики растворения лекарственного средства оценивают, исходя из фактора сходимости (f2), который рассчитывают по уравнению:

i=n   _   _  2 -0,5
f  = 50 x log {[1 + (1/n) x Сумма (R - T ) ]     x 100};
2                           i-1    i   i

где n - число временных точек;
_
R   - количество лекарственного средства, перешедшее  в  раствор  из
i    препарата сравнения  в  i-той  временной   точке (в среднем, в
процентах);
_
Т , - количество лекарственного средства, перешедшее  в  раствор  из
i    исследуемого препарата в i-той временной точке  (в среднем,  в
процентах).

Оценку эквивалентности кинетики растворения проводят при следующих условиях:

- для каждой временной точки для каждого препарата проводят не менее 12 параллельных определений;
- только одно из рассчитанных средних значений для каждого препарата может быть больше 85%;
- величина стандартного отклонения для каждого среднего значения, за исключением первой временной точки, не должна быть больше 10%.

Кинетика растворения лекарственного средства считается эквивалентной, если значение f_2 лежит в пределах от 50 до 100. В том случае, когда более 85% лекарственного средства переходит в раствор в течение 15 мин, кинетика растворения считается эквивалентной без математической оценки.

Приложение 5

Перечень лекарственных средств, для которых допускается проведение исследований биоэквивалентности на крупных лабораторных животных

Заместитель Министра
здравоохранения и социального развития
Российской Федерации                                                                          В.И. Стародубов

Авторы
Список обозначений
Введение
1. Терминология
2. Объекты исследований
3. Испытуемые
4. Регламент фармакокинетического исследования
5. Аналитический метод
6. Анализ фармакокинетических данных
7. Статистическая оценка биоэквивалентности
8. Исключение резко выделяющихся наблюдений
9. Группа исследователей-специалистов в области фармакокинетики
10. Протокол проведения исследований
11. Отчетная документация
Приложение 1. Основные принципы составления информации для добровольца с формой информированного согласия
Приложение 2. Отчет о серьезном нежелательном явлении
Приложение 3. Вопросы планирования исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов
Приложение 4. Исследования кинетики растворения лекарственных средств
Приложение 5. Перечень лекарственных средств, для которых допускается проведение исследований биоэквивалентности на крупных лабораторных животных